Terapia Epigenomica en el Leiomioma uterino

Tema:  Acetato de ulipristal en el tratamiento de los miomas uterinos

Mecanismo epigenómico tratado: desmetilacion del ADN 

Como se lo hizo: el acetato de ulipristal se une con gran afinidad al RP y lo estabiliza en una conformación antagonista, e inhibe la 

transcripción inducida por la progesterona. Este farmaco realiza metabolismo en hígado mediante el citocromo CYP3A4 y el proceso de N-desmetilación. Esto da lugar a sus principales metabolitos: ulipristal N-monodesmetilado y ulipristal N-didesmetilado.

 Resultados:

A corto plazo se consiguió de forma más rápida que leuprolide el control del sangrado, y ambos 

fármacos consiguieron reducciones considerables en el volumen de los miomas. 

REFERENCIAS: 

1) Navarro A, Yin P, Monsivais D, Lin SM, Du P, Wei JJ, et al. PlosOne. [Online].; 2012 [cited 2020 Enero. Available from: https://addi.ehu.es/bitstream/handle/10810/30786/TFG_Martinez_Rios_Rev.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Técnicas de Edición de Acidos Nucléicos

La técnica de edición de ácidos nucleicos no es nada más que una terapia genética que utiliza la introducción de material de ácidos nucleicos (ADN-ácido desoxirribonucleico o ARN-ácido ribonucleico) o sus derivados los cuales codifican información que es leída por la máquina de transcripción nuclear produciendo proteínas terapéuticas para el tratamiento de ciertas enfermedades. En este caso para el leiomioma el uso del vector adenoviral dirigido ofrece un método de tratamiento potencialmente seguro, eficaz, localizado y no quirúrgico para mujeres con leiomiomas uterinos sintomáticos

Tipo de Edición: in vivo en células somáticas

Dirigido hacia: Genes relacionados con la matriz extracelular (TGF beta 3) y genes relacionados con la angiogénesis (VEGF e IGF-1)

Dirigido por: vector de adenovirus dirigido, Ad-SSTR-RGD-TK / GCV

Órgano a tratar: útero

Vía de administración:  inyección intratumoral directa por vía subcutánea

Resultados:

A corto produjo una disminución significativa en el tamaño de las lesiones de leiomioma en un 23.4%

A mediano plazo inhibió la proliferación celular mientras inducía la apoptosis e inhibía la expresión de la matriz extracelular y los genes relacionados con la angiogénesis

A largo plazo reduce eficazmente el tamaño del tumor en el leiomioma sin diseminación a otros órganos

REFERENCIAS:

1) Abdelaziz M, Sherif L, ElKhiary M, Nair S, Shalaby S, Mohamed S, et al. PubMed. [Online].; 2016 [cited 2020 Enero. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5933189/.

Terapia Regenerativa con Stem Cells para Leiomioma Uterino

Se sabe que las primeras evidencias de la existencia de una población de células madre miometriales están relacionadas con la embriología del tracto reproductivo femenino y en relación a los miomas, dado que no se sabe de un origen especifico, se podría asociar con trastornos en la función, proliferación y el destino de un subconjunto de células miometriales candidatas a células madre mesenquimales. Las células madre contribuyen a los mecanismos de reparación de tejidos en diferentes órganos maternos.

Tipo de Stem Cells: células madre de embriones de alta pura (PESC TM) dosificación – 50 000 000 / infusión. Datos recientes in vitro sugieren que el Grupo de Alta Movilidad  A (HMGA), genes que codifican la no histona de unión al ADN  proteínas que controlan el crecimiento celular mediante regulación indirecta  del proceso de transcripción del ADN, puede estar involucrado en el  patrón de proliferación anormal visto en miomas

Método de obtención: Se emplearon aceleradores lineales con técnica de protección

Vía de administración: Transplante por injerto locales, factores tróficos, o la modulación de la inflamación.

Resultados: 

A corto plazo logra reducer el volumen uterino y del mioma

A medio plazo  los leiomiomas tienen un menor porcentaje de las células SP en comparación con el tejido normal de miometrio 

A largo plazo la expresión interrumpida en tejidos adultos juega un papel vital papel en el crecimiento de una variedad de tumores mesenquimales  como resultado

REFERENCIAS:

1) Carneiro MM. ResearchGate. [Online].; 2016 [cited 2019 Diciembre. Available from: https://www.researchgate.net/publication/295672069_Stem_cells_and_uterine_leiomyomas_What_is_the_evidence.

2) Anonimo. NBScience. [Online].; 2019 [cited 2019 Diciembre. Available from: https://nbscience.com/es/can-i-do-embryonic-stem-cell-therapy-will-it-affect-after-treatment-%EF%BC%9Fi-have-uterine-myoma-and-ovarian-cyst/

Transgénico vegetal o animal para Leiomioma uterino

Bien se sabe que los miomas o leiomiomas uterinos pueden ser el resultado de una alteración a nivel de las hormonas y la SHBG (Globulina fijadora de hormonas sexuales), es una glucoproteína que se va a fijar a las hormonas sexuales, específicamente a testosterona y estradiol ayudaran a la regulación de las mismas. 

Tema: Mecanismo moleculares que regulan la expresión de SHBG

Tipo de Animal: Ratones transgénicos K.I para la SHBG humana 

Mecanismo de obtención: mediante microinyeccion en los núcleos de embriones de ratón de transgenes de 4,3 kb y 11kb del gen de la SHGB humana. 

Resultado: Mediante el uso de los ratones trasngenicos para la SHGB se ha logrado entender la función de esta glucoproteina y el impacto que tiene sobre la actividad biologica de los esteroides sexuales, asi como estudiar las unidades de trasncripcion relacionadas en la expresión de los diferentes tejidos y se logra analizar su regulación por diversos factores. Ademas gracias a esto se logro encontrar que en el leiomioma uterino que la co-expresion de la proteina OTR con la caveolina-1 podrían producirse a través de la SHBG

VENTAJAS DE LOS TRANSGENICOS

• Eficiencia de en términos productivos
• Resistencia a plagas
• Producción con menor uso de agua
• Producción de alimentos con mejor sabor
• Permite crecimiento de áreas domésticas
• Ahorro de recursos

DESVENTAJAS DE LOS TRANSGENICOS

• Efectos negativos a largo plazo
• Incremento de sustancias toxicas en el ambiente
• Perdida de la biodiversidad
• Contaminación del suelo
• Daños irreversibles en plantas y animales tratados
• Aparecimiento de nuevas alergias alimentarias

REFERENCIAS

1) López CS. Mecanismo Moleculares que Regulan la Expresion de SHBG. [Online].; 2019. Available from: https://ddd.uab.cat/pub/tesis/2016/hdl_10803_392712/csl1de1.pdf.

2) Alemañ M. Cefegen. [Online].; 2015 [cited 2019 Diciembre. Available from: https://cefegen.es/blog/los-alimentos-transgenicos-ventajas-y-desventajas.

Ejemplo de ADN Recombinante Artificial

En Leiomioma Uterino:

Las citocinas recombinates son un medio para analizar que sucede en el leiomioma. Recientemente se descubrió como el papel del activador del receptor de citocinas del ligando de factor nuclear κ-Β (RANKL), su receptor activador del factor nuclear κ-Β (RANK); y el inhibidor de la vía RANKL / RANK RANK-Fc afecta en el crecimiento de leiomioma. Para ello se evaluó los niveles de ARNm o proteína de RANKL, RANK y marcadores de proliferación ciclina D1 y Ki67 en diversos tejidos de leiomioma y poblaciones celulares; se realizaron experimentos con xenoinjerto humano para determinar los efectos de RANK-Fc sobre el crecimiento de leiomioma in vivo. Se llego a la conclusión que  los niveles de ARNm de RANKL en el leiomioma fueron significativamente más altos que los de los tejidos miometriales

REFERENCIAS

1) Ikhena DE y col. PubMed. [Online].; 2018 [cited 2019 Diciembre. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/m/pubmed/29741640/?i=9&from=recombinant%20drug%20uterine%20cancer.

2) Sepúlveda J, Alarcón MÁ. Scielo. [Online].; 2016 [cited 2019 Diciembre. Available from: https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-75262016000100009. 

Ejemplo de Recombinación de ácidos nucléicos que suceden en la naturaleza

En primer lugar se necesita conocer que el ADN recombinante es aquel material genético formado por la unión de dos moléculas de ADN que tienen diferente origen. Un ejemplo característico es la transformación de plásmido pero también uno no muy conocido es la producción de  levaduras que reproducen por gemación multicelular o por gemación polar además de utilizar glicosilación proteica, elemento no utilizado por las bacterias

REFERENCIAS

1) Suárez Caridad. Levadura Saccharomyces cerevisiae y la producción de alcohol. [Online].; 2015 [cited 2019 Diciembre. Available from:: https://www.google.com/url?sa=t&source=web&rct=j&url=https://www.redalyc.org/pdf/2231/223148420004.pdf&ved=2ahUKEwj1l7b26KjmAhXHpFkKHWrBD9gQFjALegQIBBAB&usg=AOvVaw1yQcDyKIVJ1FFjhFF4JYSq

Tecnica molecular de PCR de miRNAs

La expresión de miRNAs en las células del leiomioma no son iguales a las miometriales normales y dado esto se utilizo PCR de tiempo real para comparar diferencias ademas de poder dilucidar si el perfil de expresión de miRNA en las células del leiomioma que no distorsionan la cavidad endometrial es diferente al de las células del leiomioma que si distorsionan.  Como resultado el nivel de expresión relativo de miR-15b estaba regulado al alza, y los niveles de expresión relativos de miR-29a, -29b, -29c, -197 y -200c estaban regulados negativamente en las células del leiomioma en comparación con los de las células miometrio normal. 

REFERENCIAS

Kim Y.J.; KimY.Y.; Shin J.H.; Kim H.; Ku S.Y.; & Suh C.S. PubMed. [Online].; 2018 [cited 2019 Noviembre. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30149651.

Prueba de Microarray

El empleo de Microarrays de alta densidad de oligopéptidos es de utilidad para la realizaron de perfiles de expresión de genes donde se averiguo que las células madre CD34+/CD49b+ se diferencian en células intermedias CD34+/CD49b-, que luego se diferencian terminalmente en células CD34-/CD49b- y frente a esto se descubrió que la ruta de señalización de IGF y IGF2 esta sobreexpresada en células CD34+/CD49b- frente a CD34-/CD49b- lo que contribuye a la proliferación de células madre de leiomioma. 

REFERENCIAS 

1) Moravek M.B.; Yin P.; Coon J.S.; Ono M.; Druschitz S.A.; Malpani S.S.; Dyson M.T.; Rademaker A.W.; Robins J.C.; Wei J.J.; Kim J.J.; Bulun S.E. PubMed. [Online].; 2017 [cited 2019 Noviembre. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28324020. 2) Serena H, Pellicer Martínez A, Esteban Ruiz FJ, Horcajadas Almansa JA. Roderic. [Online].; 2015 [cited 2019 Noviembre. Available from: http://roderic.uv.es/handle/10550/50604.

Prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) del Leiomioma Uterino

Tema: Análisis de la extracción de ADN del material de parafina para analizar micro satélites inestables de genes relacionados con el leiomioma uterino.

Objetivo: Lograr describir un protocolo de como se realiza la extracción de ADN del tejido de parafina para su análisis en biología molecular.

Muestra: Bloques de parafina que contienen fragmentos de tejido miometrial

Ácido Nucleico: ADN genómico

Extracción del ADN:

Lisis: Desparafinación por baño de xileno y solución con promega

Separación: Centrifugación

Purificación: Kit de purificación de ADN genómico Wizard - Promega

Genes: Microsatélites relacionados a leiomioma

Tipo de PCR: PCR standard

Desnaturalizacion: 65°C, 90seg

Hibridación: 50°C, 90seg               →30 ciclos
Elongación: 65°C, 90seg

Visualización: EFO

REFERENCIAS

1) Nascimento EM, Spinelli MO, Rodrigues CJ, Bozzini N. Scielo. [Online].; 2013 [cited 2019 Noviembre. Available from: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1676-24442003000300013#%3Cb%3Efigura%3C/b%3E2.

Prueba de tamizaje y una confirmatoria para leiomioma uterino

PRUEBA DE TAMIZAJE

Es una detección temprana para establecer quien puede o no padecer una patología, pero no es usual para la detección de los leiomiomas; actualmente las tecnologías de secuenciación permiten estudios de tamizaje del genoma para identificar genes asociados con la susceptibilidad a los mismos. La STE20-like quinasa se expresa en la proliferación mioblástica y es activado por alteraciones epiteliales. 

PRUEBA CONFIRMATORIA

La cascada de JNK es escencial en la respuesta a estrés celular e incluye a Ste20-like quinasa como estéril, pero es más recomendable usar ultrasonografía (transabdominal/transvaginal), RM, radiografías de la pelvis y TC.

REFERENCIAS

1) King MW. themedicalbiochemistrypage.org. [Online].; 2017 [cited 2019 Noviembre. Available from: https://themedicalbiochemistrypage.org/es/signal-transduction-sp.php

2) Cuello. M, Miranda. V, Ralph C. Ginecología Genneral y Salud de la Mujer. Cuello M, editor. Chile: Ediciones Universidad Catolica de Chile; 2017.

Alteraciones de la Epigenómica del Leiomioma uterino

La epigenómica está formada por algunos compuestos químicos y proteínas o mejor conocidas como "etiquetas" químicas las cuales se pueden unir al ADN logrando dirigir acciones como activación o desactivación de genes, a esto se lo denomina imprinting. En el leimioma uterino se conoce que existe un gen que realiza imprinting  que está asociado con el crecimiento anómalo de células mesodérmicas y la sobreexpresión del gen PEG1/MEST aumentaba en esta patología. 

REFERENCIAS

1) Moon YS, Park SK, Kim HT, Lee TS, Kim JH, Choi YS. PubMed. [Online].; 2015 [cited 2019 Noviembre 3. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20339302. 

2) Anonimo. Naional Human Genome Research Institute. [Online].; 2019 [cited 2019 Noviembre 3. Available from: https://www.genome.gov/es/about-genomics/fact-sheets/Epigenomica.

Alteraciones de la traducción del Leiomioma uterino

Como se a visto anteriormente el leiomioma se ve involucrado en ciertos fallos genómicos y la traducción no es la excepción. Existen estudios que indican que el ARNm y la expresión de proteínas de los receptores ER-a y ER-B estan en niveles muy altos, suceso que no es lo normal en comparación con el miometrio sano, hipótesis que indica que los estrógenos pueden estimular el crecimiento de los leiomiomas junto con la acción de citocinas y FGF. También se puede deber a la disminución de la apoptosis por una hiperexpresión de la proteína BCL-2. 

REFERENCIAS

1. Hernández-Valencia M, Valerio-Castro E, Tercero-Valdez-Zúñiga C, Barrón-Vallejo J, Luna-Rojas R. scielo.com. [Online].; 2017 [cited 2019 Octubre 26. Available from: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0300-90412017000900611.

Alteraciones de la transcripción del Leiomioma del útero

Las alteraciones de transcripción en el Leiomioma uterino ocurren por la mutación de un regulador transcripcional conocido como complejo mediador de la subunidad 12 (MED12).  El complejo se encuentra en el cromosoma X el cual codificara la proteína 250-kDa  la misma que se va a ver involucrada en la regulación transcripcional del complejo RNA polimerasa II. Alrededor del 70% de los leiomiomas se dan por dicha mutación y ademas de codificar la proteína 250-kDa, MED12 interactúa con la función de los receptores de estrógenos α y β así provocando un aumento en el crecimiento del leiomioma. 

REFERENCIAS

1. Mittal. P.; Shin. Yh.; Yatsenko. SA.; Castro. CA.; Surti. U.; Rajkovic A. National Center for Biotechnology Information. [Online].; 2015 [cited 2019 Octubre 19. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4563761/.

Alteraciones de la replicación del Leiomioma del útero

El leiomioma uterino tiene un origen monoclonal y su crecimiento suele estar relacionado con la expansión clonal de una sola célula; en la mayoría de los casos, alrededor del 60%, los miomas tienen un cariotipo normal pero el 40% restante se lo asocia con alteraciones citogenéticas como las translocaciones entre cromosomas 12:14 (la mas común) y 6:10, trisomía 12, deleciones en cromosomas 7q, 3q y 1q y rearreglos de los cromosomas 6q, 10q y 13q. El primer gen encontrado fue el HMA2 disregulado por la traslocación 12:14.

REFERENCIAS
1. Vargas-Hernández VM. Leiomiomatosis uterina. Aspectos epidemiológicos, fisiopatogénicos, reproductivos, clínicos y terapéuticos. [Online].; 2013 [cited 2019 Septiembre 05. Available from: https://www.medigraphic.com/pdfs/juarez/ju-2013/ju133e.pdf.

2. Ruiz MEO. Miomatosis uterina. [Online].; 2014 [cited 2019 Septiembre 12. Available from: https://www.medigraphic.com/pdfs/abc/bc-2009/bc094h.pdf.

LEIOMIOMA DEL UTERO

Puede que esta enfermedad suene extraña para alguien que no conozca del tema pero no es nada mas que un tumor benigno en el miometrio uterino, en otras palabras significa que se formo una masa que no es de índole maligno en el músculo liso del útero. El tumor crece de forma lenta y la mayoría de veces las pacientes afectadas no presentan ninguna sintomatología pero en un 20 a 40% pueden manifestarse con una hemorragia anormal, dolor crónico y sensación extraña en la zona pélvica. 

REFERENCIAS
1. Dr. Joji Ueno. Que son los leiomiomas uterinos?. Instituto Gera. [Online].; 2018 [cited 2019 Septiembre 05. Available from: https://clinicagera.com.br/leiomiomas-uterinos/

Bienvenid@s a mi blog, mi nombre es Emily Vaca y este proyecto es con fines académicos en relación a la asignatura de Biología Molecular de tercer semestre de la carrera de Medicina de la Universidad Central del Ecuador. El propósito de este blog es publicar varios temas de interés común y de ámbito científico en lo cual, se tomara la importancia de dar a conocer los procesos que ocurren a nivel molecular y que contribuyen a la información genética.